常見問題

解決方案

新購色譜柱如何活化

使用新色譜柱之前，必須用 100%甲醇 30-40 倍柱體積進行沖洗活化。

如何過渡到流動相

先用流動相使用的有機溶劑沖洗 20-30 倍柱體積，將流動相中的緩沖鹽換成水，沖洗 20-30 倍柱積，再用流動相沖洗 30-40倍柱體積。

如何過渡到流動相

先用流動相使用的有機溶劑沖洗 20-30 倍柱體積，將流動相中的緩沖鹽換成水，沖洗 20-30 倍柱積，再用流動相沖洗 30-40倍柱體積。

使用完色譜柱如何沖洗保存

使用完色譜柱，先用乙腈：水=10:90 沖洗 60 倍柱體積，再用100%乙腈沖洗 40 倍柱體積，保存于乙腈中，將色譜柱兩頭的堵頭擰緊，放于盒中。若進行長期保存，定期將色譜柱拿出，用乙腈沖洗，保證色譜柱中的保存液不干涸。

三聚氰胺的主峰與雜質峰分不開

1 調整流動相比例，加大緩沖液的比例。C18 柱調整流動相至離子對試劑：乙腈=92：8，C8 柱調整流動相至離子對試劑：乙腈=90：10（液相方法）。2 將柱溫設置于 40℃以上。

基線不平

1 平衡時間過短：延長平衡時間。
2 色譜柱污染：沖洗色譜柱。
3 色譜柱沒有連接好，有漏液現象：檢查連接情況。
4 液相儀器檢測器污染：進行儀器維護。
5 液相儀器檢測器氘燈能量過低：更換檢測器氘燈。

主峰出現裂分，峰型較寬

1 溶劑效應：用國標方法溶解，降低溶解溶劑強度。
2 色譜柱污染：沖洗色譜柱，若嚴重污染，更換色譜柱。
3 色譜柱填料塌陷：維修或更換色譜柱。
4 液相儀器柱外效應過大：更換管路，減小柱外效應。
5 樣品體積過大：用流動相配樣，總的樣品體積小于*峰
的 15%。
6 將色譜柱柱溫過低：提高柱溫。

色譜柱蛋白污染，如何再生

沖洗色譜柱方法：（前步無法將色譜柱再生，進行下一步）1%乙酸水溶液 →1%三*乙酸水溶液 → 0.1%三*乙酸：異丙醇=40:60 → NaCl，Na3PO4，Na2SO4 水溶液 0.5-1.0M (Na3PO4pH7.0) →DMSO：水=50:50/DMF：水=50:50。

壓力不穩

1 泵內有空氣：清除泵內空氣，對溶劑進行脫氣處理。
2 比例閥失效：更換比例閥。
3 泵密封墊損壞：更換密封墊。
4 溶劑中有氣泡：對溶劑脫氣，必要時改變脫氣方法。
5 系統漏液：找出漏點，密封。
6 梯度洗脫：壓力波動是正常的。
7 單向閥堵塞：超聲波清洗單向組件。
8 單向閥泄露：更換密封裝置。

保留時間不穩定

1 柱溫變化：保持恒定柱溫。
2 等度與梯度間未能充分平衡：至少用 10 倍柱體積的流動相
平衡柱。
3 緩沖液容量不夠：用>25mmol/L 的緩沖液。
4 柱污染：每天沖洗柱。

5 柱內條件變化：穩定進樣條件，調節流動相。
6 柱快達到壽命：采用保護柱。

保留時間縮短

1 流速增加：檢查泵，重新設定流速。
2 樣品超載：降低樣品進樣量。
3 鍵合相流失，流動相 pH 值超出適用范圍，色譜柱連接方向
錯誤。
4 流動相組成變化：防止流動相蒸發或沉淀。
5 溫度增加。

保留時間延長

1 流速下降：管路泄漏，更換泵密封圈，排除泵內氣泡。
2 硅膠柱活性變化：可以用流動相改性劑，如加三乙胺，或
采用其它堿鈍化色譜柱柱。
3 鍵合相流失：流動相 pH 值超出適用范圍，色譜柱連接方向
錯誤。
4 流動相組成變化：防止流動相蒸發或沉淀。
5 溫度降低。

鬼峰

1 進樣閥殘余峰：用強溶劑清洗閥，改進閥和樣品的清洗。
2 樣品中未知物：處理樣品。
3 柱未平衡：重新平衡柱，用流動相作樣品溶劑（尤其是離
子對色譜）。
4 三*乙酸（TFA）氧化（肽譜）：每天新配，用抗氧化劑。
5 水污染（反相）：通過變化平衡時間檢查水質量，用 HPLC
級的水。

基線噪音

1 氣泡（尖銳峰）：流動相脫氣，加柱后背壓。
2 污染（隨即噪聲）：清洗柱，凈化樣品，用 HPLC 級試劑。
3 檢測器燈連續噪聲：更換氘燈。
4 電干擾（偶然噪聲）：采用穩定電源，檢查干擾的來源（如
水浴等）。
5 檢測器中有氣泡：流動相脫氣，加柱后背壓。

峰拖尾

1 柱超載：降低樣品量，增加柱直徑或采用較高容量的固定
相。
2 峰干擾：清潔樣品，調整流動相。
3 硅羥基作用：加三乙胺，用堿屏蔽硅羥基活性，增加緩沖
液或鹽的濃度降低流動相 pH 值，鈍化樣品。
4 篩板堵塞：超聲清洗或更換篩板，加在線過濾器過濾樣品。
5 柱塌陷或形成短路通道：更換色譜柱，采用較弱腐蝕性條
件。
6 死體積或柱外體積過大：盡可能采用細內徑的連接管。
7 柱效下降：用較低腐蝕條件，更換柱或采用保護柱。

峰展寬

1 進樣體積過大：用流動相配樣，總的樣品體積小于*峰
的 15%。
2 在進樣閥中造成峰擴展：進樣前后排除氣泡以降低擴散。
3 數據系統采樣速率太慢：設定速率應是每峰大于 10 點。
4 檢測器時間常數過大：設定時間常數為*峰半寬的 10%。5 流動相粘度過高：增加柱溫，采用低粘度流動相。
6 檢測池體積過大：用小體積池，卸下熱交換器。
7 保留時間過長：將連接管徑和連接管長度降至小，采用
細內徑管路。
8 柱外體積過大：將連接管徑和連接管長度降至小，采用
細內徑管路。9 樣品過載：降低進樣濃度，或減少進樣體積。